GRUPO HOSPITAL UNIVERSITARIO DE GETAFE Y DPTO. DE FARMACOLOGIA UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MADRID

El grupo HUG-UAM está compuesto por investigadores de las dos instituciones con una amplia trayectoria en proyectos y publicaciones conjuntas en el campo de la disfunción endotelial. Nuestros trabajos se han centrado en dos grandes áreas en las que el daño vascular es muy relevante y en el que el papel del endotelio es crucial para producir los graves efectos asociados a dichas entidades en las personas mayores: la diabetes y el propio proceso de envejecimiento. Nuestros estudios han abarcado modelos animales y células y tejidos procedentes de animales y de seres humanos. Las técnicas experimentales que hemos utilizado en el abordaje experimental de nuestros campos de interés van desde técnicas de biología celular y molecular, a estudios de reactividad vascular in vitro e in vivo, llegando a participar en estudios epidemiológicos de cohortes. En los últimos cinco años hemos ampliado nuestro foco de interés a dos campos muy relacionados con la diabetes y el envejecimiento: la fragilidad como generadora de riesgo de desarrollo de discapacidad y otros resultados adversos en salud (caídas, hospitalización, ingreso en Residencias o muerte) y el papel de la grasa visceral en la generación de daño vascular en dos situaciones donde esta grasa visceral está aumentada: la obesidad y el envejecimiento.

Nuestro grupo ha publicado más de 150 artículos originales en revistas de elevado factor de impacto (Circulation, Hypertension, Aging Cell, Br. Med J, J Clin Endocrin Metab, PlosOne, Circulation Res, Diabetologia, J Hypertension, Br J Pharmacol, J Nutr, etc) y ha liderado más de 30 proyectos de ámbito nacional y europeo, junto a multitud de ensayos clínicos nacionales e internacionales.

Se han dirigido más de una veintena de Tesis Doctorales y participamos activamente en programas de formación, pregrado, predoctoral, postdoctora y MIR. Conformando así un grupo de marcada orientación transdisciplinar, que combina diferentes habilidades teórico-prácticas enfocadas sobre temas comunes de interés y con una clara vocación de investigación trasnacional orientada a resolver los problemas de salud planteados por los ancianos relacionados con nuestras áreas de interés.

El coordinador de RETICEF, Dr. Leocadio Rodríguez Mañas, lidera este grupo.

1º.- Osteoporosis. Factores de riesgo y epidemiología
2º.- Osteoporosis. Genética.
3º.-Diferenciación de las células madre mesenquimales a osteoblastos, adipocitos o vasos. Estudio de los genes y factores relacionados. Empleo en clínica humana
4º. Sistema endocrino de la vitamina D y envejecimiento.
5º.-Acidos grasos y envejecimiento
6º.-Carotenoides y envejecimiento.

Método automático para la determinación de vitaminas liposolubles y 25OHD3 en suero.

Este método utiliza un sistema totalmente automático para determinar el perfil de vitamina D, basado en el uso de extracción en fase sólida acoplada en-línea con cromatografía líquida-espectrometría de masas triple cuadrupolo. La capacidad de cuantificación y la selectividad de la espectrometría de masas se ve aumentada usando MS/MS en tándem como se hace en este método para evitar errores en la cuantificación.

Preparación de la muestra con precipitación de proteínas previa con tetrahidrofurano, posteriormente se introduce la muestra en el sistema de preconcentración/lavado mediante extracción en fase sólida, para posteriormente realizar el desarrollo cromatográfico y la etapa de cuantificación mediante espectrometría de masas con monitorización de reacciones múltiples.

El método consta de dos etapas de extracción-derivatización con potasa en metanol y con ácido en metanol para ácidos grasos esterificados y libres, respectivamente. Además dicho método puede separar ácidos grasos cis y trans. Estudios de asociación genéticos mediante genotipado de polimorfismos.

Debido a la importancia que posee para el mantenimiento y regeneración ósea las células madre mesenquimales, progenitoras entre otros tipos celulares de los osteoblastos, con esta línea se pretende evaluar distintos fármacos y compuestos naturales sobre la capacidad de diferenciación de las células madre mesenquimales con el objeto de determinar cuáles pueden favorecer o desfavorecer la formación de nuevo hueso. Los resultados obtenidos en esta línea pueden abrir nuevas estrategias terapéuticas para prevenir y combatir la osteoporosis.

El objetivo de esta línea de investigación es identificar en células madre de humanos, genes que intervengan en la diferenciación a osteoblastos y adipocitos, y cuya expresión se asocie a la osteoporosis. Para ello, se pretenden realizar estudios de genómica funcional para comparar los perfiles de expresión génica entre células madre procedentes de mujeres osteoporóticas y no osteoporóticas.

Efectos del ejercicio físico sobre la capacidad funciona.

Grupo clínico asociado que va a desarrollar una cohorte de centenarios.

El Grupo los componen tres geriatras, un médico de familia, un epidemiólogo y una especialista en análisis clínicos.

En la cohorte de centenarios que se va a desarrollar y en el control, se incluirán datos demográficos, variables clínicas, consumo de fármacos, comorbilidad, valoración funcional (física, cognitiva, psíquica, sensorial, social), presencia de síndromes geriátricos, calidad de vida, bienestar, consumo de recursos sanitarios y sociales.

CETIR Grupo Médico: Diagnóstico por imagen e investigación aplicada. Imagen molecular.
TRABECULAE: Investigación aplicada a calidad ósea y biomecánica.

Equipamiento técnico:

Laboratorio para producción de isótopos para PET y radiofármacos:


·      Ciclotron PET Trace 16.5/8.4 MeV, con dianas de producción para F18, C11 y N13 .
Tres módulos de síntesis, dos para compuestos fluorados y otro para compuestos con nitrógeno. Un modulo para dispensación automática de radiofármacos.
Laboratorio de control de calidad. Cromatografía de capa fina, cromatografía liquida de alta resolución y cromatografía de gas.
Unidad de radio farmacia equipada para preparación y dispensado de radio fármacos y marcaje celular.
Investigación básica con equipo técnico para manejo de pequeños animales.

Las líneas de investigación actuales incluyen:

·      Estudio de crecimientos celulares de fracciones tumorales.
·      Mediciones de actividad glicolítica (18F-Fluorodeoxiglucosa). Cuantificación de síntesis de DNA (11C-Timidina, 18F-Fluoro-Timidina).
·      Estudio de respuesta tumoral a nuevos agentes quimioterapicos. Predicción de respuesta tumoral.
·      Estudio de biodistribución de nuevas drogas. Marcaje selectivo con F18o C11 ·      Estudio de farmacocinética de nuevas moléculas, después de marcaje selectivo con isótopos emisores de radiación gamma o de positrones.
·      Visualización y cuantificación de neuroreceptores (dopaminergicos, serotoninergicos y de sistema benzodiazepinico).
·      Estudio de drogas con acción selectiva sobre procesos de neurotransmisión.
·      Estudio y cuantificación de transferencia genética y expresión. Reporte/terapéutico de secuencias genéticas. Sistemas de reporte gene/reporte prueba. Evaluación de terapia génica.

A)      INVESTIGACIÓN MÉDICA APLICADA

1)       Digitalización de imagen médica de última generación con conversor a formato DICOM.
2)       Análisis de calidad y resistencia ósea
2.1)     Trabeculae Q-Bone®: Análisis morfológico, textural y biomecánico óseo de imagen médica digitalizada
2.2)     Micro-TC: Análisis densitométrico y microestructural no destructivo mediante microtomografía computarizada
2.3)    Espectroscopía Raman: Análisis ultraestructural óseo no destructivo
2.4)     Sistema IGFA (Image-Guided Failure Análisis): Ensayos biomecánicos destructivos en Micro-TC
2.5)    Máquina Universal de Ensayos: Ensayos biomecánicos destructivos
2.6)     Determinación de Contenido en Cenizas Mediante incineración de muestras óseas
2.7)     Determinación de Calcio y Fósforo en Cenizas Óseas. Mediante Espectrometría de Absorción Atómica y Espectrometría de Emisión Óptica, respectivamente.

3)       Consultoría en implantes protésicos
3.1)     Trabeculae SACRA-ATC®: Sistema de ayuda al diagnóstico y seguimiento evolutivo clínico-radiológico de las artroplastias totales de cadera

B)      UNIDAD DE APOYO A LA INVESTIGACIÓN

1)     CRO en ensayos clínicos
2)     Asesoramiento en diseño, metodología, recogida de datos, análisis bioestadístico y divulgación científica

El laboratorio de Comunicación Intecelular se organiza con una triple finalidad:

1) Estudiar el mecanismo de acción de lal melatonina, tanto a nivel de sus acciones mediadas por receptores específicos como las acciones independientes de receptor
2) Estudiar el daño oxidativo mitocondrial que se produce en el envejecimiento y las enfemedades degenerativas y
3) Evaluar el uso terapéutico de la melatonina y compuestos análogos sintéticos en esas situaciones.
Para ello, se hacen dos tipos de estudios:
1) estudios experimentales, en los que utilizamos modelos animales y de cultivos celulares para simular el envejecimiento (ratones SAM, de envejecimiento acelerado), el parkinson (ratones C57/Bl/6 tratados con MPTP, y células PC12 en cultivo incubadas con rotenona), la epilepsia (ratas Wistar tratadas con pentilenetetrazol), y shock séptico (ratones C57/Bl/6 con punción ileocecal o inyectados con lipopolisacáridos bacterianos); y
2) Estudios clínicos, en donde evaluamos el papel de la melatonina para contrarrestar el daño oxidativo en diferentes situaciones clínicas (epilepsia, isquemia/reperfusión, shock séptico).

Líneas de investigación:

-Mecanismos de regulación y señalización intramitocondriales por la melatonina
-Daño mitocondrial y su reparación en procesos neurodegenerativos y sepsis
-Caracterización, purificación y expresión del receptor nuclear y mitocondrial de melatonina: Interacción entre el receptor de membrana y el nuclear. señales intracelulares e intranucleares en respuesta a la acción de la melatonina.
- Evaluación de la actividad antioxidante y antiexcitotóxica de la melatonina y análogos sintéticos. Estudio en modelos experimentales de epilepsia, parkinson y sepsis
-Papel protector de la melatonina en situaciones clínicas de estrés oxidativo: estudios en convulsiones infantiles, isquemia-reperfusión y shock séptico

Técnicas disponibles:

-Ultracentrifugación
-Fraccionamiento subcelular
-Cultivos celulares
-Cultivos mitocondriales
-Respiración mitocondrial
-Electroforesis, isoelectroenfoque
-Western blot, Northern blot
-RT-PCR, QPCR
-Análisis de imagen
-Cromatografía, HPLC-UV, HPLC-DE
-Técnicas de unión de ligando
-Autorradiografía
-Análisis enzimático
-Técnicas bioquímicas de rutina
-Espectrofotometría UV y visible, , diodo-array
-Espectrofluorescencia

Actividades:

     - Fisiología animal (Lic. Biología)     
     - Cronobiología  (Lic. Medicina)     

         -Cronobiología del envjecimiento (Master y Programa de doctorado en Envejecimiento)         
         -El Reloj Biológico del Envejecimiento (Universidad Internacional del Mar)

          -Efectos de la alteración del sistema circadiano (cronodisrupción) sobre el envejecimiento en modelos animales (Octodon degus) y ratones.           
          -Evaluación clínica del estatus del sistema circadiano mediante termometría de la piel periférica y actimetría (humanos).           
          -Obtención de biomarcadores de envejecimiento a apartir de la evaluación funcional del sistema circadiano (humanos y modelos animales)           
          -Alteraciones del sistema circadiano inducidas por diferentes patologías. Evaluación de la eficacia de tratamientos.

Acuarios en circuito cerrado para estudios de envejecimiento en peces de ciclo vital corto.

Análisis espectrorradiométrico de la luz.

Determinacion mediante RIA y ELISA de melatonina y cortisol.

      -Equipo estereotáxico para lesiones electrolíticas de nucleo supraquiasmático.       
      -Implantación de sensores de temperatura intraperitoneales.       

       -Registro computerizado continuo de actividad motora en rueda, general, temperatura intraperitoneal y acrividad alimentaria.        
       -Evaluación de aprendizaje y memoria mediante el laberinto de Barnes, el test CAN y el laberinto en Y        
       -Evaluación clínica del estatus del sistema circadiano        
       -Monitorización continua de la temperatura de la muñeca mediante el empleo de data loggers        
       -Monitorización continua de la actividad motora y de la posición del corporal mediante el empleo de actimetros       

El grupo de investigación “Envejecer en Leganés” nace en 1993 con ocasión de la puesta en marcha de la cohorte de personas mayores de 65 años en esa población, que pertenece al área metropolitana de Madrid.

Su objetivo era describir los cambios en el nivel de salud física y mental, la discapacidad, el uso de servicios en la población, la relación con las redes y el apoyo social.

La cohorte elegida en 1993 (baseline) fue de 1.560 personas, a la que se incorporaron otras 139 personas de 65 y 66 años en 1995.

Se han realizado 5 nuevas oleadas de seguimiento en 1995, 1997, 1999, 2006 y 2008-2010.

En este último año se registraron 1.150 fallecimientos entre los miembros de la cohorte inicial.

En las dos últimas etapas (2006-2010) se han introducido nuevos objetivos como la fragilidad y medidas preventivas desde el nivel de atención primaria.

El grupo de investigación fue creado por Mª Victoria Zunzunegui y Francois Beland, que continúan formando parte de él. A lo largo de estos 17 años, nuevos investigadores se han ido incorporando, hasta llegar al momento actual en que está formado por geriatras, médicos de familia y epidemiólogos. Investigadores jóvenes han ido entrando y saliendo del grupo como becarios pre y post doctorado.

El grupo se centra en el estudio del perfil inmunológico de la individuos como base para determinar la edad biológica de los mismos, así como de la situación oxidativa e inflamatoria en la que puede participar el sistema inmunitario.

También en la utilización de estrategias (nutrición, ejercicio, ayuda psicológica, …) que permitan hacer más lento el proceso de envejecimiento, hecho que se valora, fundamentalmente a través del estado funcional y redox del sistema inmunitario

1) Inmunosenescencia: cambios en el sistema inmune con el envejecimiento cronológico y en modelos de envejecimiento (estados de ansiedad y depresión,soledad, obesidad, menopausia, …)
2) Neuroinmunomodulación (repercusion de estados emocionales sobre la función inmunológica. Efecto de neurotransmisores en la función del sistema inmunitario,..)
3) Estrés oxidativo y envejecimiento
4) Nutrición en el sistema inmunológico y en la neuroinmunomodulación. Cambios con el envejecimiento
5) Ejercicio Físico en el sistema inmunológico y en la neuroinmunomodulación. Cambios con el envejecimiento.
6) Enfermedades neurodegenerativas. Marcadores bioquímicos e inmunológicos.

-Determinación de parámetros de estrés oxidativo, inflamación y daño a macromoléculas: Glutation reducido (GSH), glutation oxidado (GSSG), actividad de superóxido dismutasa (SOD), de catalasa (CAT), de glutation peroxidasa (GPx), de glutation reductasa (Gr), de xantin oxidasa (XO) (parámetros valorados por espectrofotometría, western blot y fluorometría). Niveles de anión superóxido extracelular (espectrofotometría), niveles de malondialdehido (MDA) (valorado por HPLC), de 8oxodG (valorado por HPLC). Citoquinas proinflamatorias (PGE2, TNFa,…) (valoradas por EIA). Valoración de homocisteina por nefelometría. Valoración de 8 isoprostano (EIA) y de NO (electroforesis capilar).
-Técnicas inmunológicas: Adherencia a tejidos (endotelio, colágeno, fibronectina..) de fagocitos (neutrófilos y macrófagos), movilidad y quimiotaxis de fagocitos (neutrófilos y macrófagos), fagocitosis de neutrófilos y macrófagos, capacidad digestiva de fagocitos mediante producción intracelular de anión superóxido y de especies reactivas de oxígeno (tanto a nivel basal como estimulado, por técnicas espectrofotométriocas y fluorimétricas. Adherencia de linfocitos, movilidad y quimiotaxis de linfocitos, capacidad proliferatica de linfocitos en respuesta a mitógenos de linfocitos T (Concanavalina A y fitohemaglutinina) y de linfocitos B (lipopolisacarido). Actividad antitumoral de células natural killer (NK) frente a líneas tumorales. Producción y liberación de citoquinas (IL-2, TNFa; IL-6, IL-8, IL-10, IL-1b..) por EIA y por citometría de flujo. Niveles de receptors de citoquinas (RTNFalfa, RIL-6, …) por EIAs. Subpoblaciones celulares (citometría de flujo). Señalización intracelular (AMPc, PKC, IP3, TolR,
-Microscopía óptica y electrónica.

- Cultivos celulares.
-Valoración de apoptosis (caspasas, sondas fluorescentes, ..)
- Valoraciones hormonales.
- Valoración de aminoácidos en Liquido Cefalorraquideo por HPLC
-Valoración de neurodegeneración (determinaciones en líquido cefalorraquídeo): Proteína Tau (EIA), Beta amiloide (EIA), Fas y Fas Ligando (EIA), citoquinas (EIA), Factores de crecimiento nervioso (EIA).
- Cirugía experimental.
- Pruebas de conducta en animales.

-Ratones ICR (CD1), BALB/c,.. Ratas Wistar,..
-Cultivos celulares
-Modelos de envejecimiento prematuro en ratones ICR y BALB/c
-Modelos de sepsis/shock séptico en ratones ICR y BALB/c.
- Modelo de menopausia en ratas Wistar y en ratones ICR.
-Modelos de ansiedad en ratones ICR y BAB/c.
- Modelo de esquizofrenia por separación materna, en ratas.
- Rata geneticamente obesa Zucker-Leprfa.

Grupo clínico dedicado a la epidemiología del envejecimiento.

1.  Epidemiología del deterioro cognitivo

2. Fragilidad
a.       Epidemiología
b.      Fragilidad como determinante de fragilidad y discapacidad.
c.       Fenotipos de fragilidad
d.      Bases fisiopatológicas

3.  Enfermedad vascular.
a.       Epidemiología
b.      Factores precipitantes de eventos

Estudio Toledo de envejecimiento saludable: Estudio de cohortes, longitudinal sobre 2.500 sujetos del Partido Judicial de Toledo.

Grupo “FARMACOLOGÍA de la Inflamación”, Departamento de Farmacología, Universidad de Valencia.

http://anurix.com/webs/farmacologia/

Responsable: Mª José Alcaraz

Nuestro grupo es multidisciplinar, con la participación de F. Gomar, Jefe del Servicio de Traumatología y Ortopedia del Hospital Clínico de Valencia, I. Guillén, inmunóloga y seis farmacólogos: M.J. Alcaraz, catedrática, M . Payá, catedrático, M.L. Ferrándiz, profesora titular, M.C. Terencio, profesora titular, M.C. Montesinos, investigadora contratada y Amalia Ubeda, profesora titular, así como un técnico de investigación y varios becarios.

1. Descripción de las líneas de investigación

1.A. Bases moleculares de la destrucción articular en la artrosis

Desde hace varios años venimos investigando en los mecanismos implicados en la destrucción articular, especialmente en la artrosis, considerada la principal causa de discapacidad en los ancianos. Nuestro trabajo se ha centrado en una serie de aspectos como el estudio de los mediadores determinantes del avance de la lesión articular, los posibles mecanismos de protección y las principales vías de señalización implicadas.

Se han llevado a cabo estudios en explantes de cartílago, condrocitos y sinoviocitos de pacientes artrósicos, para determinar la expresión génica y proteica de factores que pueden estar relacionados con la progresión de la enfermedad. Se ha determinado las consecuencias de la sobre-expresión o de la inhibición (en ocasiones, por silenciamiento génico con siARN) de dichos factores sobre el metabolismo celular, síntesis de componentes de la matriz extracelular, producción de citocinas, quimiocinas, factores de crecimiento y diferenciación celular, eicosanoides, especies reactivas, etc. Se han estudiado tambien las vías de señalización y de transcripción relacionadas con dichos factores. Estudios de nuestro grupo han demostrado un papel protector de hemo oxigenasa-1 frente al estrés celular en sinoviocitos, condrocitos y cartílago de pacientes artrósicos. Esta proteína tiene propiedades antiinflamatorias y antioxidantes y es una diana que ofrece interesantes alternativas para controlar las consecuencias del estrés celular en el envejecimiento.

1.B. Nuevas estrategias farmacológicas

1.B.1 Nuevos fármacos en la artrosis y osteoporosis

En explantes de cartílago de pacientes artrósicos se estudia la influencia de diversos tratamientos sobre la degradación del cartílago articular, producción de metaloproteinasas de matriz (MMPs) y agrecanasas. En condrocitos de pacientes artrósicos se han llevado a cabo estudios de proliferación, apoptosis y necrosis. Síntesis y expresión de glicosaminoglicanos, colágeno y otros componentes de la matriz extracelular. En dichas células y en sinoviocitos de pacientes artrósicos, se han realizado ensayos de actividad enzimática, expresión de proteínas y ARNm para MMPs, inhibidores tisulares, agrecanasas, ciclooxigenasas, prostaglandin E sintasas, NO sintasas, fosfolipasas, hemo oxigenasas, etc. También se han determinado numerosos mediadores de la inflamación, como eicosanoides, citocinas, quimiocinas, especies reactivas, factores de crecimiento, etc. además de factores de transcripción, activación de cinasas, etc.

Se han desarrollado modelos de artrosis por envejecimiento: como la artrosis espontánea en ratones STR/ort, siguiendo la evolución temporal de la enfermedad, con estudios bioquímicos de biomarcadores en suero y en los tejidos articulares, estudios radiológicos, histológicos, etc. Todas estas determinaciones han permitido relacionar la aparición y avance de las lesiones con la edad del animal y proponer diversos mecanismos que pueden regular estos procesos. También se han desarrollado modelos animales de osteoporosis en rata (ACLT+ovariectomía) y ratón (CIA+ovariectomía).

1.B.2 Nuevos fármacos antiinflamatorios.

Se han estudiado distintos grupos de fármacos antiinflamatorios, algunos análogos de productos marinos. En esta línea realizamos una patente de cacospongionolida B, como nuevo antiinflamatorio inhibidor de fosfolipasa A2, en colaboración con el CNR de Italia. Recientemente, hemos estudiado nuevos inhibidores de prostaglandin E sintasa microsomal, en diversos modelos experimentales. Por ejemplo, en modelos celulares en células primarias y líneas celulares de monocitos, macrófagos, fibroblastos, células endoteliales, así como en modelos animales en rata y ratón: artritis por adyuvante, artritis por colágeno, angiogénesis e inflamación tópica.

1.B.3 Modulación de adenosina en la curacion de heridas.

Adenosina tiene un papel fisiológico a diversos niveles que puede ser protector. Por ejemplo, adenosina puede minimizar el daño tisular asociado a la reperfusión tras un periodo de isquemia, mientras que la hipoxia modula la expresión de receptores de la adenosina en células endoteliales y macrófagos hacia un fenotipo protector. Se han realizado estudios in vitro en modelos de células microendoteliales, fibroblastos y queratinocitos humanos. Esta diana puede permitir hallar nuevas estrategias terapéuticas para la curación de heridas en grupos de población muy susceptibles como diábeticos, obesos y ancianos.

Prevención con antioxidantes de la lesión oxidativa por radicales libres en la isquemia-reperfusión en un modelo de trasplante pancreático-duodenal en el cerdo. Evidencias considerables sugieren que los radicales libres derivados del oxígeno están implicados en la patogénesis de la lesión pancreática por isquemia-reperfusión. Nuestro grupo de investigación analiza el potencial uso del tratamiento con melatonina para reducir la lesión oxidativa y preservar la función pancreática alterada por los radicales libres generados en un modelo de isquemia-reperfusión de trasplante pancreático-duodenal, compararando su capacidad con un antioxidante bien conocido como el ácido ascórbico.

Efectos del ejercicio físico agudo en la fluidez de la membrana eritrocitaria en adultos sanos. El consumo de oxígeno aumenta significativamente con el ejercicio físico y este incremento se acompaña de una elevación brusca de la tasa de producción de radicales libres, incrementándose el riesgo de lesión tisular. La peroxidación lipídica de los fosfolípidos de la membrana celular por el ataque de radicales libres ocasiona una pérdida de fluidez en la membrana. Nuestro grupo investiga el efecto de este fenómeno sobre la estructura de los eritrocitos.

Efecto del daño oxidativo en un modelo experimental de la esclerosis lateral amiotrófica. La esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa progresiva que afecta principalmente a las motoneuronas del córtex, troncoencéfalo y médula espinal. Se trata de una enfermedad poco frecuente (3,5 casos por cada 100.000 habitantes), con una esperanza de vida de tan sólo 3-5 años. A pesar de los avances realizados en los últimos 10 años, todavía se trata de una enfermedad sin causa etiopatogénica determinada y sin tratamiento curativo. Nuestro grupo trabaja en el mejor conocimiento del modelo animal que se utiliza para el estudio de ELA, el ratón transgénico G93A, mediante la medición de diferente indicadores de estrés oxidativo en diferentes tejidos a lo largo de la vida del animal. El conocimiento de todos estos parámetros será de gran utilidad en el futuro a la hora de estudiar posibles tratamientos para esta enfermedad.

Técnicas:

Determinación de la fluidez en membranas celulares y mitocondriales por espectroscopia de fluorescencia.
Cuantificación de malonildialdehido.
Valoración de restos carbonilo de las proteínas.
Actividad total antioxidante.
Determinación de enzimas antioxidantes: glutation peroxidasa y reductasa, catalasa y superóxido dismutasa.
PCR a tiempo real.
Exploración funcional cicloergométrica.

Líneas de investigación

1.- Mecanismos de acoplamiento excitación-contracción en el músculo liso

2- Cambios en la función neuromuscular y homeostasis del calcio en el envejecimiento del músculo liso

Técnicas:

1.Servicios Sanitarios

2. Investigación Clínica

3.Estado de Salud y Calidad de Vida

4.Servicios Sociales

5.Investigación Básica

Nuestro Grupo esta especializado en el estudio de los daños a macromoléculas por el estrés oxidativo y en el estudio de las actividades enzimáticas de los principales enzimas antioxidantes.

Así mismo, se encuentra especializado en el estudio de los principales tipos de muerte celular programada que se han descrito hasta el momento: apoptosis y autofagia.

Técnicas del grupo:

Caracterización de autofagia.
Tipos; Caracterización de apoptosis. Tipos; Actividad de SOD, CAT y GR;
Daño a proteínas y lípidos;
Cociente de actividades enzimáticas lisosomales: Catepsina D/catepsina B.

SEGUNDO PREMIO NACIONAL DE INVESTIGACION EN MEDICINA DEL DEPORTE 2010 por el estudio
"El entrenamiento crónico induce un perfil saludable de biomarcadores geriátricos emergentes en varones mayores de 65 años" logrado por el Grupo de Respuesta Celular al Daño Oxidativo miembro de RETICEF.

Grupo multidisciplinar compuesto por clínicos que atienden enfermedades metabólicas óseas (reumatólogos, internistas, anestesistas) y cirujanos ortopedas, junto con básicos del campo de la medicina molecular y la histología.

1.- Genética de la enfermedades metabólicas óseas
2.- Dolor en las enfermedades metabólicas óseas e inflamatorias reumatológicas
3.- Farmacogenética en el tratamiento de las enfermedades metabólicas óseas
4.- Caracterización fenotípica y funcional de osteoclastos en las enfermedades metabólicas óseas y artrosis

5.- Uso de células madre mesenquimales (mesenchymal stem cells) en las fracturas y la osteonecrosis experimental

6.- Estudio de biomateriales (materiales biocompatibles) y análisis de las carácterísticas la respuesta del tejido óseo a su implantación (estudios histomorfométricos y biomecánicos).

-       Genómica funcional, proteómica y transcriptómica.
-       Métodos no invasivos de diagnóstico y seguimiento
-       Aislamiento de células óseas por citometría de flujo
-       Histomorfometría ósea
-       Implantación ósea de células madre mesenquimales humanas

Está ubicado en el Servicio de Bioquímica Clínica del HU Virgen del Rocio, del que el responsable del grupo es Jefe de Servicio.

Realiza investigaciones básicas en el área de la melatonina y el sistema inmune aunque está abierto a colaboraciones estrictamente clínicas relacionadas con el envejecimiento y la biología tumoral.

- Estudio del sistema OPG/RANKL (secreción y expresión) en cultivos primarios de osteoblastos humanos de pacientes con osteoporosis (fractura de cadera) y osteoartritis.
- Efecto de fármacos antiresortivos (alendronato, risedroanto y raloxifeno) sobre la expresión de OPG y RANKL en cultivos primarios de osteoblastos.
- Liberación de mediadores locales (IL1,IL6 y TNFa) y funcionamiento del sistema OPG/RANKL en cultivos de osteoblastos de artritis reumatoide.
- Separación y caracterización de células preosteoblásticas en sangre periférica. Estudio comparativo en distintas patologías con afectación ósea.
- Diabetes mellitus: masa ósea, remodelado óseo y fracturas en relación a tipo de diabetes, control metabólico y tiempo de evolución. Estudios clínicos tranversales y longitudinales en diabetes tipo 1.
- Diabetes mellitus: Comportamiento de osteoblastos en cultivos (proliferación, apoptosis, genes de la vía Wnt, respuesta a distintas concentraciones de ROS y proteinas glicadas). Comparación con personas de edad avanzada no diabéticas.
- Nuevo estudio epidemiológico de incidencia de fractura de cadera con factores de riesgo para valorar el cambio de incidencia en los últimos 15-20 años. Estudio de incidencia de una segunda fractura de cadera.
- Relación de masa ósea en la niñez e incidencia de fracturas en la adolescencia/juventud.
- Estudios metabólicos en pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal y en litiasis renal.

Los estudios en desarrollo por nuestro grupo abordan hipótesis que contribuirían a identificar nuevas dianas terapéuticas en la fisiopatología ósea y renal. El interés del grupo por el estudio de ciertas alteraciones asociadas a estas patologías (angiogénesis, osteopenia y nefropatías asociadas al envejecimiento y a la diabetes) establece una convergencia con otros grupos participantes en la red RETICEF.

En particular, las líneas de investigación del grupo son:

1) Estudio de los mecanismos osteogénicos de la proteína relacionada con la parathormona (PTHrP);
2) La PTHrP como citoquina implicada en la fisiopatología renal (fracaso renal y nefropatía diabética);
3) Factores óseos (PTHrP, osteoprotegerina y ligando del receptor activador del NF-kappaB) en el desarrollo tumoral.

Respecto al tema 1), disponemos de varios modelos de pérdida de masa ósea en ratón in vivo, incluyendo la osteopenia asociada a diabetes. Además, disponemos de cultivos de osteoprogenitores y células osteoblásticas humanas, de rata y de ratón, con distinto grado de diferenciación.
Nuestro grupo ha iniciado recientemente un estudio para mejorar la calidad y la temporalidad de la consolidación de fracturas con defecto óseo mediante el estímulo de la osteoconducción y la osteoinducción con implantes biocerámicos cargados con PTHrP, a través de su liberación controlada, en conejos (una colaboración con el Prof. Enrique Gómez Barrena, Videdecano de Investigación de la UAM y miembro de plantilla del Dpto. de Traumatología de la FJD).
Los estudios relacionados con el metabolismo óseo se realizarán fundamentalmente en la Fundación Jiménez Díaz, con la participación del equipo colaborador en la UAH en determinados aspectos (p.e., estudios de las proteínas del ciclo celular) en los que posee experiencia.

Respecto a la línea 2), disponemos de modelos de fracaso renal agudo nefrotóxico y nefropatía diabética en ratones. Además, contamos con una serie de líneas celulares renales (túbuloepiteliales y glomerulares) de ratón y de rata.
Los estudios en la fisiopatología renal se llevarán a cabo fundamentalmente en la UAH, con la participación del equipo de la Fundación Jiménez Díaz en aquéllos aspectos relacionados con la fibrosis y los procesos inflamatorios en el riñón dañado.
El grupo dispone de una variedad de anticuerpos, sondas para PCR a tiempo real (sistema TaqMan de Applied Biosystems), dominantes negativos, inhibidores y siRNAs relacionados con vías de señalización y citoquinas de interés en las temáticas citadas.

En cuanto al tema 3), ésta es una línea de investigación clínica (traslacional) colateral del laboratorio, relacionada con estudios de hace años llevados a cabo por nuestro grupo sobre la fisiopatología de la hipercalcemia tumoral. Nuestro grupo dispone de una variedad de anticuerpos anti-PTHrP para la detección de esta proteína en biopsias tumorales.

Más información sobre nuestro grupo, instalaciones y laboratorio.

Nuestro grupo denominado “Metabolismo Óseo” lleva a cabo actividades de docencia, tanto de grado como de postgrado, así como de investigación. El Investigador Principal del Grupo, Dr. Manuel Muñoz Torres, es Profesor Asociado del Departamento de Medicina de la Universidad de Granada, así como Facultativo Especialista de Área en Endocrinología y Nutrición del Hospital Universitario San Cecilio de Granada. Ha dirigido 23 tesis doctorales, 13 proyectos de investigación subvencionados por entidades públicas, de los que se ha originado una producción científica de 51 publicaciones en libros y más de 185 artículos publicados tanto a nivel nacional, como internacional.

Además el grupo de investigación cuenta con dos experimentados investigadores básicos, Dr. José Antonio García Salcedo, el cual cuenta con financiación procedente del 7º Programa Marco (FP7) de la Unión Europea, y la Dra. Sonia Morales Santana, responsable de la plataforma y servicio de proteómica del Hospital Clínico San Cecilio.

Las dos líneas de investigación del laboratorio, y los objetivos específicos perseguidos en cada uno de ellos, se describen a continuación:

*Análisis del papel del sistema OPG/RANKL como predictor de enfermedad cardiovascular y enfermedad osteoporótica en pacientes con Diabetes Mellitus tipo 2.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

1º) Analizar la relación entre los niveles séricos de OPG y la Densidad mineral ósea en diabéticos tipo 2.
2º) Analizar la relación entre los niveles séricos de OPG y las fracturas vertebrales detectadas por morfometrÍa semicuantitativa en diabéticos tipo 2.
3º) Analizar la relación entre los niveles séricos de OPG y los factores de riesgo clínicos de enfermedad metabólica ósea en diabéticos tipo 2.
4º) Analizar la relación entre los niveles séricos de OPG y los factores de riesgo clínicos de enfermedad cardiovascular en diabéticos tipo 2.
5º) Analizar la relación entre los niveles séricos de OPG y los eventos cardiovasculares en diabéticos tipo 2.
6º) Analizar la relación entre los niveles séricos de OPG y el grosor de la íntima-media carotídea en diabéticos tipo 2.
7º) Analizar la relación entre los niveles séricos de OPG y los valores dehomocisteína, lipoproteína a y PCR ultrasensible en diabéticos tipo 2.

*Estudio de las bases moleculares de la enfermedad metabólica ósea y sus posibles conexiones con otras enfermedades.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

1º) Identificación de biomarcadores predictores de osteoporosis y enfermedad cardiovascular en pacientes con diabetes mellitus tipo 2. Análisis proteómico del plasma de pacientes con diabetes mellitus tipo 2 y de controles sanos que ya hemos obtenido en estudio previo (Proyecto FIS PI052114. Ministerio de Sanidad y Consumo 2006-2008. IP, Dr M. Muñoz Torres).

2º) Identificación de biomarcadores de no respuesta en pacientes con osteoporosis postmenopáusica tratados con fármacos antirresortivos. Análisis proteómico del plasma de pacientes respondedores y no repondedores del proyecto multicéntrico de grupo de osteoporosis de RETICEF (Proyecto FIS PI052233. Ministerio de Sanidad y Consumo 2006-2008 en el que hemos participado como grupo colaborador).

Desde el año 2003 desarrolla su línea de investigación en el campo de los cuidados a personas mayores a través de la Red Temática en Investigación en Cuidados a Personas mayores (RIMARED), centrado en el estudio de los cuidadores principales de personas mayores no institucionalizadas, problemas éticos y jurídicos de la toma de decisiones sanitarias en personas mayores, atención domiciliaria y continuidad de cuidados, intervenciones de enfermería en cuidados en personas mayores (caídas, incontinencia y lesiones por presión), evaluación de resultados de salud y procesos de vulnerabilidad en la vejez.

1.Encuesta a nivel estatal para determinar las necesidades de salud y la efectividad y la eficiencia de los cuidados que reciben las personas de 65 o más años desde un punto de vista integral que englobe las situaciones propias de las personas mayores junto con las de sus cuidadores y los profesionales e instituciones sanitarias de su entorno.

2.Procesos de vulnerabilidad en la vejez. Seguimiento longitudinal de los efectos ambientales y sociales;

3.Identificación y valoración de los registros de enfermería para población igual o mayor de 65 años en atención primaria y sociosanitaria, en relación con los cuidados principales.

Líneas de Investigación:

1.Práctica clínica en el envejecimiento basada en la evidencia

2.Revisiones sistemáticas sobre manejo de los cuidados al envejecimiento

3. Identificación, elaboración y validación de guías de práctica clínica/protocolos sobre los problemas de salud más prevalentes en el envejecimiento: incontinencia urinaria, caídas, lesiones por presión, trastornos cognitivos y nutrición, entre otros.

4. Impacto económico de los cuidados asociados al envejecimiento

Proyectos de investigación activos a fecha 2008:

Síntesis de estudios cualitativos: El proceso de adaptación a la dependencia en las personas mayores y sus familias

De acuerdo al funcionamiento de la red el grupo es responsable del desarrollado y puesta en marcha una Plataforma Bioinformática, de gestión de datos y bioestadística de RETICEF, facilitando el manejo de datos entre todos los investigadores de la Red. A través de esta plataforma se da el apoyo estadísticos y traductor a los investigadores de la red, facilitando la labor investigadora de los integrantes

Grupo constituido por clínicos de varias especialidades (Medicina Interna, Reumatología, Traumatología, Ginecología) e investigadores básicos (biólogos).

Experiencia en estudios epidemiológicos de cohorte (en este momento participando en un estudio internacional de >40.000 mujeres, en nuestro grupo 3.000), estudios de fisiopatología de la osteoporosis secundaria a diversas enfermedades, estudios de genética y de biología celular.

Estudios de densitometría ósea por haz radiológico (DEXA) o por ultrasonidos.

Cohorte de 1500 mujeres postmenopáusicas con material genético y estudio fenotípico de variables óseas.

Posibilidad de realizar estudios en cultivos de osteoblastos, fibroblastos o células precursoras, bien en líneas fisiológicas (obtenidas de explantes óseos) o en líneas inmortalizadas comerciales, con análisis de expresión génica y proteica.

Análisis funcionales genómicos.

Estudios de asociación de variantes alélicas de SNPs de genes candidatos y bloques haplotípicos.

Estudios de genoma total (genome-wide) por la disponibilidad del CRG del Parque de Investigación en que se encuentra nuestro instituto.

Estudios morfológicos de muestras óseas (quirúrgicas o por biopsia de Bordier) mediante histomorfometría de hueso sin decalcificar.

Análisis micromecánico de tejido óseo mediante nanoindentador.

1.Vitamina D, tanto desde el punto de vista epidemiológico (niveles a lo largo del año, porcentaje de población con insuficiencia, etc) como funcional (principalmente, relación con las células del sistema inmune).

2.Citocinas implicadas en la remodelación ósea, en particular la IL-4.

3.Estudio funcional de los osteoblastos bajo diversos estímulos.

4.Genética de la osteoporosis (polimorfismos del gen del receptor de la vitamina D, del receptor de los estrógenos, de la aromatasa, de la vía Wnt, etc).

5.Epidemiología de las fracturas osteoporóticas, tanto en nuestra región como a nivel nacional, esto último participando en estudios multicéntricos.

6.Relación de la osteoporosis con otros procesos, como la diabetes, la enfermedad vascular, el síndrome metabólico o la reacción de fase aguda.

7.Establecimiento y seguimiento de una cohorte de 3000 personas de más de 50 años para estudio de las enfermedades metabólicas óseas y del metabolismo mineral.

1 ESTRÉS OXIDATIVOS

2 DIFERENCIAS DE LONGEVIDAD ENTRE SEXOS

3 EJERCICIO, ESTRÉS OXIDATIVO, LONGEVIDAD.

4 LONGEVIDAD EN DROSOPHILA MELANOGASTER

5 ENFERMEDAD ALZHEIMER

Parámetros de estrés oxidativo

MDA (malonedialdehido) como daño oxidativo lipídico

Animales de experimentación

Ratones Transgénicos APP/PSEN1 que expresan la proteína precursora de beta-amiloide y la enzima presinilina.

Variables que podemos ofrecer

GSH como marcador de estrés oxidativo (estatus redox)

GSSG como marcador de estrés oxidativo (estatus redox)

Proteínas oxidadas

MODIFICACIONES DE LA ACTIVIDAD DE GENES ASOCIADOS AL ENVEJECIMIENTO POR MANIPULACIONES NUTRICIONALES Y FISIOLÓGICAS. EFECTO SOBRE LA LONGEVIDAD. Investigador principal: JOSE VIÑA RIBES. 2007-2010. Financiado por MEC-CICYT

PAPEL DE LOS RADICALES LIBRES EN EL ENVEJECIMIENTO Y ENFERMEDADES ASOCIADAS EN ESPECIAL LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER Y LA SARCOPENIA SENIR. PREVENCIÓN MEDIANTE LA INDUCCIÓN DE GENES ANTIOXIDANTES. Investigador principal: JOSE VIÑA RIBES. 13/12/04 – 13/12/07. Financiado por MINISTERIO DE EDUCACIÓN Y CIENCIA

DETERMINACIÓN DE LOS BENEFICIOS DEL EJERCICIO FÍSICO MODERADO FRENTE AL EJERCICIO FÍSICO AGOTADOR. Investigador principal: JOSE VIÑA RIBES. 2004-2005. Financiado por GENERALITAT VALENCIANA. CONSELLERIA D’EMPRESA, UNIVERSITAT I CIENCIA GV04B-136

ESTUDIO DE LOS EFECTOS BENEFICIOSOS DEL CONSUMO MODERADO DE VINO SOBRE LA LONGEVIDAD Y SOBRE PARAMETROS BIOLOGICOS DE ENVEJECIMIENTO EN SERES HUMANOS. Investigador principal: JOSE VIÑA RIBES. 2005. Financiado por MINISTERIO DE EDUCACIÓN Y CIENCIA

ESTRÉS OXIDATIVO Y DIABETES: PAPEL PROTECTOR DE LOS ESTRÓGENOS. Número de expediente: 12.919. Investigador principal: BORRÁS BLASCO, CONSUELO. 1 ENERO 2007 – 31 DICIEMBRE 2007. Financiado por CONSELLERIA D’EMPRESA, UNIVERSIDAD Y CIENCIA

EJERCICIO FÍSICO PARA EL TRATAMIENTO Y LA PREVENCIÓN DE LA SARCOPENIA SENIL. BASES MOLECULARES. Número de exp.: CSD 2007-24/UPB20. Investigador principal: GOMEZ CABRERA, Mª CARMEN. 1 ENERO 2007 – 31 DICIEMBRE 2007. Financiado por Consejo Superior de Deportes

EFECTO DEL VINO Y LA SOJA SOBRE LA LONGEVIDAD Y PARÁMETROS DE ESTRÁS OXIDATIVO EN MOSCAS DROSOPHILA MELANOGASTER. Investigador principal: GAMBINI BUCHÓN. JUAN. 1 ENERO 2008 – 31 DICIEMBRE 2009. Financiado por UNIVERSIDAD CATÓLICA DE VALENCIA

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1.- Aislamiento de mitocondrias de diversos tejidos animales

2.- Determinación de producción de peróxido de hidrógenos por fluorimetría

3.- Determinación de glutatión reducido, oxidado y disulfuros mixtos por HPLC

4.- Determinación de glutatión reducido por espectrofotometría

5.-.Medida de la actividad de diferentes enzimas relacionadas con el estrés oxidativo

6.- Aislamiento de RNA de diversos tejidos y de células

7.- RT-PCR semicuantitativa y cuantitativa en tiempo real.

8.- Cultivos celulares (MCF7 +/-, 3T3)

9.- Determinación de otros parámetros de estrés oxidativo

10.- Citometría de flujo

11.- Determinación de glutatión oxidado y reducido por HPLC

12.- Determinación de actividad telomerasa

13.- Western, Southern blotting

14.- Determinaciones de curvas de longevidad y de parámetros bioquímicos en moscsa Drosophila melanogaster.

15.-Tomografia de emisión de positrones para animales pequeños (PET)

16.- Cultivos primarios de células neurales